Како да потрошите спектрофотометриска анализа: 13 чекори

Спектрофотометрија - експериментален метод кој ви овозможува да ја измерите концентрацијата на растворени супстанции со износот на лесен апсорбира. Високата ефикасност на овој метод се должи на фактот дека различните соединенија се различно апсорбирани со светлина со одредена бранова должина. Во износ на премин на светлина, може да се дознае кои соединенија се присутни во растворот и ги одредуваат нивните концентрации. Во лабораториите, за овој спектрофотометар се користи посебен уред.

Чекори

Дел 1 од 3:

Подготовка на примероци

Еден. Вклучете го спектрофотометар. Повеќето спектрофотометри имаат потреба од прелиминарно греење - помагаат да се добијат попрецизни резултати. Вклучете го уредот и почекајте најмалку 15 минути пред да продолжите со мерењата.

Користете го времето за загревање за да ги подготвите примероците.

Сликата е насловена како спектрофотометриска анализа чекор 2

2. Измијте ги циветите и цевките за тестирање. Кога вршите лабораториска работа во училиште можете да дадете цевки за еднократна употреба кои не треба да се чистат. Ако користите еднократни куабети или цевки за тестирање, тие треба да бидат исцрпени пред работа. Темелно измијте ги сите јадења со деионизирана вода.

Внимавајте на претпазливост при ракување со куавети, бидејќи тие можат да бидат прилично скапи.

Не ги допирајте рацете на оние места на ѕидот на Кјут, преку кој светлото ќе помине (обично транспарентни страни).

Сликата насловена е спектрофотометриска анализа чекор 3

3. Пополнете ја базата на потребната сума на течност во студијата. Максималниот волумен на некои Cuvette е 1 милилитар (ML), додека цевките за тестирање може да се пресметаат од 5 милилитри. За да се добијат точни резултати, неопходно е ласерскиот зрак да помине низ течноста и не му наштети на празниот дел од резервоарот.

Ако ја префрлите течноста под проучување со помош на пипета, користете нова пипета за секое решение за да избегнете вкрстена контаминација на примероци.

Сликата насловена како спектрофотометриска анализа чекор 4

4. Подгответе контролно решение. Контрола, или неактивен раствор е чист растворувач, без нечистотии присутни во други примероци. На пример, ако растворете сол во вода, треба да се постави како едно решение. Ако имате обоена вода во црвено, исто така е неопходно да се земе црвена вода како празен час. Растворот за мирување мора да го има истиот волумен како и изучуваните решенија, и треба да се истура во истиот контејнер.

Сликата е насловена како спектрофотометриска анализа чекор 5

Пет. Избришете ја надворешната површина на Кјуета. Пред да поставите купувач во спектрофотометар, неопходно е да бидете сигурни дека е чиста, инаку честичките на нечистотија и прашина можат да ги нарушат резултатите. Избришете ја крпа без крпа за ѕид на купе надвор за да ги отстраните можните капки за вода и честички од прашина.

Дел 2 од 3:

Експеримент

Еден. Изберете и поставете ја брановата должина на светлината за да ги анализирате примероците. За поголема точност, користете ја светлината со една бранова должина (монохроматска светлина). Неопходно е да се избере таква бранова должина, така што светлината се апсорбира од едно од соединенијата, што треба да биде дел од растворот во студијата. Испратете ја избраната бранова должина на спектрофотометар во согласност со упатствата за операција на инструменти.

Со лабораториски часови, бранова должина на светлината може да побара од наставникот.
Бидејќи примерокот ја рефлектира целата светлина од брановата должина која одговара на бојата на ова решение, експериментот треба да користи светлина на друга бранова должина.
Објектите имаат една или друга боја поради фактот што тие ја рефлектираат светлината со соодветната бранова должина и апсорбираат зрачење со други бранови должини. Трева зелена поради фактот што содржи хлорофил, што го одразува зеленото светло и апсорбира светлина со други бранови должини.

Сликата под наслов DO направи спектрофотометриска анализа чекор 7

2. Калибрирајте го уредот во неактивен. Ставете го во носителот на спектрофотометарската кутија со неактивен и затворете го капакот на уредот. Аналогните спектрофотометри се опремени со скала со стрелки, аголот на отстапувањето на кој е определен од интензитетот на последната светлина. Во случај на раствор на мирување, стрелката ќе го одбие правото. Запишете ги читањата на инструментите во случај да ви требаат подоцна. Потоа поместете ја стрелката на нулта позиција користејќи го копчето за прилагодување (додека растворот за мирување треба да остане во уредот).

Дигиталните спектрофотометри наместо скалата се опремени со екранот, и тие можат да се калибрираат на ист начин. Поставете нула за празнење со копчињата за поставување.

Калибрацијата ќе продолжи откако ќе го добиете растворот за мирување. Кога работите со останатите примероци, светлината што се апсорбира од не-далечинскиот растворувач автоматски ќе се одземе од читањата на инструментите.

Сликата насловена е спектрофотометриска анализа чекор 8

3. Добијте хибернација со неактивен и проверете ја калибрацијата. Во отсуство на òд, стрелката треба да остане на нулта марка (нула треба да се зачува на екранот). Регл за да се стави решение во уредот и да се осигура дека спектрофотометар сé уште покажува нула. Со соодветна калибрација, уредот мора да прикажува нула и со раствор на мирување, и без него.

Во случај на читање на не-нула инструменти, повторете ја калибрацијата со едно решение.

Во случај на понатамошни проблеми, побарајте помош или упатете го Условниот уред од страна на технички персонал.

Сликата насловена е спектрофотометриска анализа чекор 9

4. Измерете ја оптичката густина на експерименталниот примерок. Излегувај од уредот за неактивен раствор и поставете ја примерокот во неа. Почекајте околу 10 минути додека стрелките не се смири или додека броевите не престанат да се менуваат. После тоа, запишете ја вредноста на вредноста на пренасочување и / или оптичка густина.

Колку повеќе светлина поминува низ примерокот, толку помалку светлината што ја апсорбира. Обично снимајте вредности на оптички густини кои имаат форма на децимална фракција, на пример 0.43.

Повторете мерења за секој примерок најмалку три пати и пронајдете ги просечните вредности. Значи, ќе добиете попрецизни резултати.

Сликата насловена како спектрофотометриска анализа чекор 10

Пет. Повторете го експериментот за други бранови должини. Примерокот може да содржи неколку непознати нечистотии кои апсорбираат светлина со различни бранови должини. За да се елиминира неизвесноста, повторете го мерењето во 25 нанометри во целиот спектар. Ова ќе ви овозможи да ги дефинирате другите соединенија кои се дел од изучувањето на растворот.

Дел 3 од 3:

Анализа на добиените податоци

Еден. Пресметајте го коефициентот на пренос и оптички примероци. Пропусниот опсег покажува како процентот на светлина помина низ примерокот и достигна детектор на спектрофотометар. Оптичката густина покажува колку светлина се апсорбира едно од соединенијата растворени во течност. Многу модерни спектрофотометри веднаш ги даваат вредностите на соодносот на пренос и оптички густина, но ако ги снимите вредностите на интензитетот, можете сами да ги пресметате овие вредности.

Коефициентот на пренос (T) е со делење на интензитетот на светлината преку светлосната мостра за интензитетот на светлината, која помина низ растворот за мирување. Како по правило, овој коефициент е напишан во форма на децимална фракција или процент. T = i / i₀, каде што е интензитетот на светлината што помина низ изучуваниот примерок, јас₀ - интензитетот на светлината што помина преку раствор за мирување.
Оптичката густина (а) е еднаква на логаритам за база од 10 од коефициентот на пренос земени со негативен знак: A = -LOG₁₀Т. Ако T е 0,1, тогаш A е 1 (0.1 е еднаква на 10 до степен -1), односно 10 проценти од лесни поминувања, а 90 проценти се апсорбира. На T = 0.01, оптичката густина A е 2 (0.01 е 10 до степен -2), односно само 1 процент од светлината поминува.

Сликата насловена како спектрофотометриска анализа чекор 12

2. Изгради зависност на оптичката густина од бранова должина. Отстрани ја оптичката густина на вертикалната оска Ој, и на хоризонталната оска на вол, означете ги брановите должини. Врвовите на оптички густина за секоја употребена бранова должина се апсорпциониот спектар на овој примерок, кој може да се утврди кои супстанции и во кои пропорции се раствораат во овој примерок.

Апсорпциониот спектар обично има максимума на одредени бранови должини, според кој можете да ја одредите соодветната супстанција.

Сликата е насловена дали спектрофотометриската анализа чекор 13

3. Споредете ја добиениот спектар на апсорпција со позната апсорпциона спектра за различни супстанции. Секое соединение има карактеристичен спектар на апсорпција, секогаш дава врв на иста бранова должина. Споредете го спектарот на непознато решение со познати спектри од различни супстанции и одредувајте кои конекции се вклучени во вашето решение.

Со овој метод, исто така можете да ја идентификувате контаминацијата на примерокот. Ако очекувате да добиете еден посебен врв на одредена бранова должина, и наместо да откриете два одделни врв, тоа значи дека нешто не е во ред со вашиот примерок.